在生物医学研究领域,Western blot技术是一种广泛应用的蛋白质检测方法。为了确保实验结果的准确性与可靠性,选择合适的内参蛋白是至关重要的一步。而在众多可供选择的内参蛋白中,GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)和β-Actin(β-肌动蛋白)因其表达稳定、分布广泛而成为最受欢迎的选择之一。
那么,这两种常见的内参蛋白各自的分子量究竟是多少呢?
首先,让我们来看看GAPDH。GAPDH是一种参与糖酵解过程的关键酶,在几乎所有类型的细胞中都有高水平表达,并且不易受到外界刺激的影响。根据现有文献报道,人源性GAPDH的分子量大约为37 kDa左右。这一数值对于大多数实验来说已经足够精确,但需要注意的是不同物种间可能存在轻微差异。
接下来是β-Actin。作为细胞骨架的重要组成部分之一,β-Actin同样具有较高的表达水平并且不易被实验条件改变。其分子量通常被测定为42 kDa。不过同样地,由于物种间的序列差异,实际测得值可能会略有波动。
值得注意的是,在使用Western blot技术时,除了关注目标蛋白与内参蛋白之间的相对分子量关系外,还需要结合具体应用场景合理选用抗体以及优化实验参数以获得最佳效果。此外,随着科学技术的进步,越来越多的研究者开始尝试寻找更加特异性强、灵敏度高的新型内参标志物来替代传统意义上的GAPDH或β-Actin。
总之,无论是GAPDH还是β-Actin,在Western blot分析过程中都扮演着不可或缺的角色。它们各自稳定的分子量特性使得它们成为了评估样本处理一致性及上样量差异的理想参照标准。然而,在实际操作过程中仍需谨慎对待,并根据具体情况灵活调整策略,从而确保最终数据的真实性和可信度。